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临床前鉴别hERG阻滞剂的铷流出试验的评价

临床前鉴别hERG阻滞剂的铷流出试验的评价

hERG阻滞剂的铷流出试验的评价

药物抑制延迟整流钾通道电流,human ether-a-go-go(hERG)可导致获得性长QT综合征,并产生潜在的致命性心律失常和猝死。在临床前开发中,阻断hERG和导致QT延长潜力的化合物,仍未得到高通量分析筛选。我们评估了铷流出试验测定hERG钾通道阻断的能力。用96孔板上培养转染hERGHEK-293细胞,并在用5.4mMRb+取代培养基,使铷离子进入细胞,随后使细胞暴露于测试化合物中,然后用含有50mM K+K通道开放缓冲液去极化取出上清液,用0.1%TritonX-100裂解细胞。通过使用火焰原子吸收光谱仪测定Rb+射流,生成待测化合物的浓度效力曲线。西沙必利的多次试验显示,抑制浓度在308.1± 11 nM~456.3 ±24 nM之间抑制Rb+外排,Z因子为0.80± 0.07 (n=5板,每个板12)。与使用电生理技术测量的值相比,hERG通道的抑制值效价向右偏移。此外,我们在Rb外排试验中评估了1910μM的盲筛化合物,并将结果与使用膜片钳电生理学和多菲菜德置换结合试验的结果进行了比较。多菲菜德置换结合试验与电生理测量hERG阻滞剂具有良好的相关性。铷流出试验缺乏准确确定阻断效力所需的灵敏度。总之,铷外排分析提供了一种更高通量的方法来识别有效的hERG通道阻断剂,但缺乏准确确定阻断效力所需的灵敏度。

仪器方法:离子通道阅读器ICR 8100/ICR 12000