钙激活氯离子通道调节剂HTS筛选
Development and validation of HTS assay for screening the calcium-activated chloride channel modulators in TMEM16A stably expressed CHO cells
钙激活氯离子通道(CaCCs)，例如TMEM16A，广泛表达于多种组织中，并参与许多重要的生理功能。我们开发并验证了一种检测系统，用于CaCC调节剂的高通量筛选(HTS)。通过该方法，通过测定氯化银沉淀物上清液中过量的银离子(Ag+)，间接检测稳定转染TMEM16A的CHO细胞的Cl−通量。筛选过程包括四个步骤：（1）TMEM16A CHO细胞在高K+和高Cl−缓冲液中孵育12min，以伊屋诺霉素为Ca离子载体；（2）细胞用低K+、无Cl−和无Ca2+缓冲液洗涤；（3）CaCC/TMEM16A在高K+、无Cl−缓冲液中激活12min；（4）使用离子通道阅读器(ICR，an AAS system)检测Ag+浓度。该检测方法可同时用于筛选CaCC激活剂和抑制剂。该试验表明，阳性对照药物NPPB、CaCCinh-A01、氟灭酸(Flu)和Eact对CaCC/TMEM16A均有良好的浓度依赖性作用。NPPB和CaCCinh-A01在300μmol L−1时完全抑制CaCC/TMEM16A电流， IC50值分别为39.35±4.72μmol L−1和6.35±0.27μmol L−1；Eact激活CaCC/TMEM16，EC50值为3.92±0.87μmol L−1。
仪器方法：离子通道阅读器ICR 8100/ICR 12000
