KCNQ/M通道的原子吸收铷离子流出试验
通道(M-cerorm)由KCNQ2/3K通道基因编码，已成为许多神经系统疾病的新药物靶点。由于缺乏直接的高通量分析和传统电生理(EP)的低通量相结合，阻碍了K+通道调节剂的快速筛选和评价。开发一种灵敏和有效的直接测量m电流活性的分析方法，对于识别新的m通道调节剂和后续研究其治疗潜力至关重要。利用一个稳定的表达大鼠KCNQ2/3 K+通道的CHO细胞系，我们开发并验证了一种基于96孔板的非放射性铷(Rb+)外排试验。Rb+流出分析法使用自动离子通道读取器(ICR)8000，直接测量功能通道的活性。通道阻断剂XE991和利那吡丁阻断了受刺激的表达KCNQ2/3的细胞Rb+外排，半抑制浓度值分别为0.15μM和1.3μM。本实验进一步评估了鉴定为KCNQ2/3的12种化合物开放剂，并将其EC50值与用EP获得的EC50值进行了比较。两种检测方法之间的正相关系数(r=0.60)高于Flexstation膜电位与EP检测方法之间的正相关系数(r=0.23)。为了简化检测和增加通量，我们证明了通过测量上清液中Rb+水平获得的EC50值与从上清液/裂解液中Rb+的比例获得的EC50值一样稳定和一致。通过仅测量上清液，ICR8000在8点滴定中的通量估计为每天40种化合物，这适用于二次确认试验。
仪器方法：离子通道阅读器ICR 8100/ICR 12000
