全血样品中核酸提取应用报告

全血样品中的核酸提取

–基于磁珠法的液体工作站前处理方法

1.方法说明：

采集回来的血样可直接进行核酸提取。提取过程采用磁珠法，该方法具有简便、高效的特点，可在液体工作站上实现完全自动控制。

2.方法原理：

血液样品与裂解液充分混合，裂解液裂解细胞膜使核酸暴露到细胞外。加入磁珠并充分混合使核酸与磁珠结合，适时添加磁场，从而使核酸与体系中的其他成分分离。利用清洗液清洗，去除体系中的盐、蛋白质等杂质。最后利用洗脱液将结合到磁珠上的核酸重新溶解。

3.实验

3.1试剂
3.1.1 AB 96 Magnetic Binding Blood DNA kit，包含：
MagSi Partical
Buffer BAL
Proteinase K
Protease Storage Buffer
Buffer AW1
Elution Buffer
3.1.2 需要准备：
异丙醇 150ul每个反应
70%乙醇 1ml每个反应

3.2 样品处理与保存
3.2.1 按照每mL血液加入1.2mg EDTA，混匀
3.2.2 存放于4℃可两日内使用，存放于-20℃可半个月内使用

3.3 核酸提取过程
3.3.1 打开液体工作站电源、PC电源及软件，完成初始化，放置好2.2ml 96孔板、磁珠与试剂在相关位置
3.3.2 每反应孔加入15ul Proteinases K
3.3.3 开启vortex磁珠混合器，保持磁珠在震荡均匀的状态下分配，每反应孔加入15ul MagSi Particles
3.3.4 加入150ul血液样本，震荡30s混匀
3.3.5 加入150ul Buffer BAL，震荡1min混匀，70℃孵育10min
3.3.6 加入150ul异丙醇，震荡2min混匀，吸磁2min，吸弃上清液
3.3.7 加入500ul Buffer AW1，震荡2min混匀，吸磁2min，吸弃上清液
3.3.8 重复3.3.7步骤一次
3.3.9 加入500ul 70%乙醇，震荡1min混匀，吸磁2min，吸弃上清液
3.3.10 重复3.3.9 步骤一次
3.3.11 加入500ul Buffer AW3，吸磁1min，吸弃上清液
3.3.12 加入100ul Elution Buffer，震荡2min混匀，65℃孵育，震荡2min混匀，吸磁5min，所得上清液即为核酸溶液。转移上清液至新的保存板中。

4. 测试

4.1 琼脂糖凝胶配制：称量0.25g琼脂糖溶入25ml 1xTAE中，微波加热使琼脂糖完全溶解，加入1ul核酸染色剂，放入制胶模块中，插上梳子，待琼脂糖凝胶完全凝固后放入电泳仪
4.2 将核酸提取物20ul + loading buffer 3ul混合，吹打混匀，上样
4.3 将marker 5ul + loading buffer 1ul混合，吹打混匀，上样
4.4 120V恒压电泳40min，放入紫外箱中观察

5. 实验结果