植物样品中核酸提取应用报告

植物样品中的核酸提取

–基于磁珠法的核酸提取

采集回来的植物样品经过研磨后进行核酸提取。提取过程采用磁珠法，该方法具有简便、高效的特点，可在液体工作站上实现完全自动控制。

2.方法原理：

植物样品在液氮低温环境下充分研磨后，与裂解液充分混合，裂解液裂解细胞壁及细胞膜使核酸暴露到细胞外。加入磁珠并充分混合使核酸与磁珠结合，适时添加磁场，从而使核酸与体系中的其他成分分离。利用清洗液清洗，去除体系中的盐、蛋白质等杂质。最后利用洗脱液将结合到磁珠上的核酸重新溶解。

3.实验

3.1试剂

3.1.1 AB 96 Magnetic Binding Plant DNA kit，包含：

MagSi Partical

Buffer SPL

Buffer SP

Buffer BW1

Buffer AE

3.1.2 需要准备：

异丙醇 400ul每个反应

80%乙醇 1.2ml每个反应

3.2 样品处理

3.2.1准备花生叶样本、研磨盘、1.5ml离心管、96深孔盘

3.2.2 1.5ml离心管中预先放入600ul buffferSPL

3.2.3 液氮环境下充分研磨花生叶，装入对应的1.5ml离心管里面，漩涡震荡20s后水浴30min

3.2.4 加入200ul bufferSP，漩涡震荡20s后冰箱放置10min

3.2.5 12000rpm离心5min，取上清

3.3 液体工作站中核酸提取过程

3.3.1 打开液体工作站电源、PC电源及软件，完成初始化，放置好2.2ml 96孔板、磁珠与试剂在相关位置

3.3.2 每反应孔加入400ul异丙醇、600ul上述上清液及15ul磁珠，震荡3min混匀，吸磁1.5min，吸弃上清液

3.3.3 加入600ul Buffer BW1，震荡1.5min混匀，吸磁40s，吸弃上清液

3.3.4 加入600ul 80%乙醇，震荡1.5min混匀，吸磁40s，吸弃上清液

3.3.5 重复3.3.7步骤一次

3.3.6 加入100ul Buffer AE，震荡1min混匀，吸磁40s，所得上清液即为核酸溶液。转移上清液至新的保存板中。

4.测试

4.1 琼脂糖凝胶配制：称量0.25g琼脂糖溶入25ml 1xTAE中，微波加热使琼脂糖完全溶解，加入1ul核酸染色剂，放入制胶模块中，插上梳子，待琼脂糖凝胶完全凝固后放入电泳仪

4.2 将核酸提取物20ul + loading buffer 3ul混合，吹打混匀，上样

4.3 将marker 5ul + loading buffer 1ul混合，吹打混匀，上样

4.4 120V恒压电泳40min，放入紫外箱中观察

5.实验结果