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MALDI-TOF-MS分析检测的前处理——磁珠纯化、靶板点样

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MALDI-TOF-MS分析检测的前处理——磁珠纯化、靶板点样

生物检材微量化

随着生物检材微量化的趋势,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)临床检验的靶点间距已经缩小到2.25毫米及以下,靶板的每一个位点上要求的制备量通常都要求在纳升至微升级。

质谱样品经过提纯富集的样品前处理,微阵列构建应用有哪些?

微生物鉴定

微生物鉴定分析前需将生物样本进行前处理,采用培养基分离纯化得到纯的微生物菌落,根据不同微生物性质差异,样品前处理不同,最简单的方法是将菌落涂布在靶标板上,干燥后直接用点样仪在靶板上点加基质液;对于需要裂解释放蛋白质的微生物,检测前需要加入裂解液裂解菌体、加入基质液与菌体裂解物(蛋白质和多肽)混合,再将混合物点在靶板上,干燥后可直接检测。

核酸质谱

核酸质谱的检测流程如下:以DNA甲基化检测为例

①DNA提取(磁珠法);

②PCR扩增;

③SAP反应(消除反应体系中剩余的dNTP);

树脂纯化(对产物进行脱盐纯化,消除盐峰干扰);

芯片点样仪将树脂纯化后的样本点印至带有基质的靶板上。

蛋白质谱

蛋白质谱样品前处理,对于高丰度样品,只需进行适当稀释后加入基质液可直接点样,而对于丰度较低样品则需经磁珠纯化后再进行靶板点样。

质谱成像

质谱成像是以质谱技术为基础的成像方法,该方法通过质谱直接扫描生物样品成像,可以在同一张组织切片或组织芯片上同时分析数百种分子的空间分布特征

质谱成像样品前处理,样品经冷冻干燥后切片,再使用基质喷涂装置将基质液均匀的喷洒在样品表面,自然干燥后就可用于检测。

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