文库制备的本质是将片段化后的基因组DNA两端加上通用接头序列,通过PCR扩增获取足够多能够上机测序的文库核酸分子。
NGS文库制备主要流程:
- 1、片段化DNA。目前常用的方法包括酶消化法、机械法如超声破碎法。片段化后的DNA大小可使用琼脂糖凝胶电泳及Agilent Bioanalyzer进行判定。
- 2、末端修复。将5′或者3′的粘性末端变成5′磷酸化的平末端。
- 3、添加接头。使用T4 DNA连接酶将Adaptor与修饰后的DNA片段相连接,然后通过琼脂糖凝胶电泳或者磁珠纯化的方法筛选出完成连接的片段。
- 4、对文库进行扩增。通过PCR反应获取到足够多带接头的DNA序列,上机完成对样本核酸序列的测序。
提高成功率
为了获得准确的测序结果,高质量的文库至关重要。但测序文库的制备,实则是一个繁琐且耗时的过程,只要过程中稍有失误,便会影响文库质量,最终影响测序结果。
而现在,为了让NGS文库制备更方便、更快速、更准确,药明激创基于领先的全自动移液工作站研发经验,全新推出一系列 NGS 文库制备新产品,帮助您提高 NGS 文库制备成功率。